前言
随着液相的普及，紫外可见分光光度计（UV）的使用频率在逐渐下降。十年前，UV大量用于溶出度和含量的测定。尤其是溶出度的测定，药典中收载了大量用UV测定溶出量的品种。目前，UV大都仅用作定性鉴别了，但其在某些特殊情况下仍有着不可替代的作用。
UV测定的优缺点：
如有辅料或是其他组分的存在，UV在某个波长下测定的是组分的叠加信号，不能区分开，而HPLC却能很好地将辅料或其他干扰组分在色谱柱上分离开，这种定量测定专属性差的缺点制约了UV的发展。但是正是这个缺点有时可能成为优点，例如利用这个“优点”可测定易降解化合物的叠加响应来计算药物的溶出度。
此外，一些溶出仪与UV联用在线测定溶出量，甚至诞生了光纤溶出仪；UV测定的成本相对HPLC也低很多。因此，UV还是有它用武之地的。在利用UV进行固体制剂溶出度和含量的定量测定时，辅料的干扰成了难以绕开的障碍。本文就笔者的相关经历并结合理论和文献，谈一谈UV测定时消除辅料干扰的一些技巧。
一、绕开辅料吸收较强的波段
这是UV测定时消除辅料干扰的最简易方法，如能用此法解决干扰问题，那最省事了。具体步骤如下：
- 分别将制剂中处方比例的主药和空白辅料配制成合适浓度的溶液，在一定波长范围内（如200nm～400nm）扫描得光谱图。
- 查看辅料和主药的光谱图，一般辅料在低波段的吸收均较大（250nm之前），从此波长往后找，看能否找到辅料的吸收几乎没有（贴近零线）而主药的吸收仍然较大的波长。如果此波长是主药的吸收峰，那更好了。如果不是吸收峰，较平坦处也行。前两者都不是，在陡坡处的波长也能勉强测定，现在UV仪的波长精度较好，误差不会太大。
- 一般溶出度测定时的辅料干扰控制在2%以内即可，当然越逼近零越好。
在此，顺便说一下，为何定量测定时要选择最大吸收波长处，HPLC也是如此，因为在最大吸收波长处，吸收最大且光谱较光滑平坦，斜率几乎为零，若因波长的精度问题轻微波动，不会引起吸收度的较大误差。而在陡坡处，斜率较大，波长的轻微误差就会引起吸收度的较大变化。不过现在的UV仪器，波长准确度能控制在0.2nm左右，这种波长误差引起的吸收度误差大可不必担心。
二、双波长等吸收差值法
此法需要满足一定的条件才适用，具体条件和步骤如下：
- 分别将制剂中处方比例的主药和空白辅料配制成合适浓度的溶液，在一定波长范围内（如200nm～400nm）扫描得光谱图。
- 查看主药和空白辅料的光谱图。如主药在λ2有较大吸收，吸收度为A1（λ2），在此波长处辅料也有吸收，为A2（λ2）。
- 查看辅料的光谱图。辅料光谱图上有无与A2（λ2）等吸收的波长，如有，假设为A2（λ1），而且在此波长处主药几乎没有吸收。
- 测定时，采用双波长测定，λ1和λ2，计算两个波长处的差值。假设在λ2处主药和辅料的总吸收度为A（λ2）。
A（λ2）= A1（λ2）+ A2（λ2）
其中A2（λ2）= A2（λ1），代入上式
A（λ2）= A1（λ2）+ A2（λ1）
A（λ2）- A2（λ1）=A1（λ2）
如此，求得的差值A（λ2）- A2（λ1）就是主药在λ2处的吸收度A1（λ2）。此法测定必须符合两个基本条件：1）干扰组分辅料在这两个波长应具有相同的吸收度；2）待测组分在这两个波长处的吸收度差值应足够大，即主药在λ2处的吸收度较大，而在λ1处几乎没有吸收。大部分品牌的UV工作站都能进行双波长测定，如岛津的UVprobe和安捷伦的21CFR紫外工作站，有的还能直接读出双波长间的差值。所以如能满足上述条件，测定过程也相当简便，主要是能很好地消除辅料的干扰。下图虽不是实际案例，但通过此示意图能方便理解。
三 导数光谱法
此法听起来似乎很玄乎，其实理解之后，也并不复杂，笔者曾经接触过这样的案例，如某片进口注册标准中的溶出度测定就是用的导数光谱法，其目的是利用导数光谱法消除片中的辅料干扰。导数光谱的定量原理：
从上式一阶导函数中，可以看出一阶导数与样品浓度仍然成线性关系。同理，二阶导数和三阶导数等高价导数也与样品浓度成线性关系。注意，这里是对光谱函数的导数，得到导数函数，而不是吸收度的导数，吸收度值是一常数，求导后为零。
利用导数光谱法消除辅料干扰的要求和步骤如下：
- 分别将制剂中处方比例的主药和空白辅料配制成合适浓度的溶液，在一定波长范围内（如200nm～400nm）扫描得光谱图。
- 查看主药和空白辅料的光谱图。将这两个光谱图分别转换成导数光谱图，岛津的UVprobe和安捷伦的21CFR紫外工作站都有此功能。在转换导数光谱时需要设置Δλ值，该值可选择默认值也可根据需要选择合适值。
- 查看主药和辅料光谱图经转换后的导数光谱图。对应于主药导数光谱图中的波峰或波谷处，辅料导数光谱图是否几乎没有吸收（越贴近零线越好），一般情况下，辅料光谱图经一阶导数转换后，原来轻微的干扰会消失殆尽。如一阶导数后，辅料还是有较大干扰，可再经二阶导数或三阶导数转换。
- 定量测定时，采用导数光谱上适宜的振幅作为定量参数，而不再称作吸收度了。常用的方法有峰谷法和峰零法。峰谷法是测量两相邻峰谷之间的垂直距离，峰零法是峰或者谷到零线之间的垂直距离。
- 方法确定后，在正式测定进行光谱扫描时，扫描的波长范围可适当缩小，如250nm～300nm,这样可节约扫描时间。
结语
上述提及的几种方式，可根据实际需要选择，能简则简，解决干扰问题就行。其实还有其他更为复杂的方式，没有必要进一步折腾。UV法如用得好用得熟练，能大大节约成本，有时还能弥补HPLC的不足。当然，随着HPLC和UPLC的快速发展，UV法只能作为配角了，主角和配角都使用恰当，事情会做得更好。本文仅代表个人观点，如有不当，还请各位同仁多多包涵。
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